技術文章 / article
骨保護素試劑盒說明書
2020-10-09 瀏覽次數：2165
一.骨保護素試劑盒產品介紹：
骨保護素(OPG)或破骨細胞抑制因子(OCIF)是腫瘤壞死因子受體群 11b 的糖蛋白，是有 380 個氨基 酸分子的合成單體， 在細胞內組合為二聚物，主要 以二硫鍵鏈接二聚物形式分泌到細胞外腔。骨保護素由包括成骨細胞在內的細胞和不同組織生成。骨保護素是通過 RANKL 誘餌受體對骨吸收進行負調控， 這樣就中和了 RANKL 在破骨細胞生成的作用。骨保護素也參與血管鈣化的調控。
二.骨保護素試劑盒應用范圍：
1.骨質疏松（1,2）
2.局部吸收活性增加的疾病（3-6）
3. 關節炎（7,8）
4.治療監控（9-11）
5.心血管疾病（12-17）
三.骨保護素試劑盒檢測步驟：
所有試劑和樣本在實驗前要平衡至室溫 （18-24℃）。 標記好 STD/SAMPLE/CTRL（標準品/樣本/質控品） 的位置。 從鋁箔袋中取出所需數量的微孔板條。將不使 用的微孔板條放回帶有干燥劑的鋁箔袋在 4℃ (2-8℃)保存，可穩定至標簽所標日期。
1）取 ASY 稀釋液（紅蓋）150µl 加入到每孔內 2）校準品/質控品/樣本各取 20µl 分別加入到相應孔 內（復孔操作），并輕輕晃動 3） 每孔內加入50µl 抗體（生物素標記OPG抗體， 綠蓋），并輕輕晃動 4）遮蓋微孔板室溫（18-24℃）下孵育 4 小時 5）用 300µl 稀釋洗液反復洗板 5 次，后一次清洗 后，于吸水紙上強拍微孔板以除去殘留的洗液 6）加入結合物（棕蓋）200µl 至每孔內 7）遮蓋微孔板室溫（18-24℃）下孵育 1 小時 8）用 300µl 稀釋洗液反復洗板 5 次，后一次清洗 后，于吸水紙上強拍微孔板以除去殘留的洗液 9）加入 TMB 底物（藍蓋）200µl 至每孔內 10）室溫（18-24℃）下避光孵育 30 分鐘 11）加入終止液（白蓋）50µl 至每孔內并輕輕晃動 12）以 450nm 波長（630nm 參考值）立即測定吸 光度
四.骨保護素試劑盒檢測原理：
本試劑盒采用夾心 ELISA 檢測人血清和血漿中 的骨保護素。添加緩沖液，標準品/樣本/ 質控品，將檢測的抗體（小鼠抗人生物素標記 OPG 單克隆抗體）移到預包被羊抗 OPG 多克隆抗體微量 滴定條中，標準品/樣本/質控品中的 OPG 與微孔中 預包被的抗體結合，與要檢測的抗體形成夾心層。 清洗所有非特異性未結合的物質。第二步，結合物
（鏈霉親和素-HRPO）加入微孔板中，與檢測抗體反 應。再次清洗后，將 TMB 底物加到微孔板中。酶催 化的底物顏色變化與 OPG 數量呈比例。用酶標儀可 以檢測到顏色變化。用標準品中獲得的值，生成吸 光度（450nm）與標準濃度的劑量反應的曲線。OPG 濃度直接從劑量曲線上獲得。
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